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您的位置:首頁>>生命科學>>酶與輔酶>>EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV
Cat. Number
EH04801
Chemical Name
EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV
Qty 1
5000U
Qty 2
25000U
References

核酸外切酶 IV Exonuclease IV來源于大腸桿菌,屬于IV型外切酶家族。Exonuclease IV是一個環狀的四聚體,每個單體包含約290個氨基酸。核酸外切酶 IV Exonuclease IV是一種雙鏈特異性的外切酶,可從DNA的3'端切除核苷酸,產生3'突出的單鏈區域和5'磷酸化的DNA斷端。Exonuclease IV是研究DNA二級結構與拓撲結構的重要工具,并在DNA修補和重組等過程中發揮重要作用。Exonuclease IV是一種具有與Exonuclease III不同作用方向的外切酶。在RPA反應中聯合使用Exonuclease III和Exonuclease IV,可以產生協同作用,全面優化RPA產物,實現更快速、更靈敏和更專一的擴增。 


規格參數:

貨號:EH04801 

規格:5000U/25000U     

為工業客戶提供n*25000U。


質量控制:

純      度: 經高效液相色譜(SEC-HPLC)和SDS-PAGE檢測,純度大于95%.

 

使用說明:

長期儲存于-80℃,首次使用后保存于-20℃,避免反復凍融。


核酸外切酶 IV Exonuclease IV催化機制如下:

a. 與DNA雙鏈區結合,內切位點識別切割位點; 

b. 外切位點將3'端的核苷酸和磷酸基團從DNA磷酸主鏈上切除; 

c. Exonuclease IV沿著DNA鏈移向5'端,重復步驟b,依序切除核苷酸;

d. 當遇到DNA單鏈區時,酶失去活性,終止切割。


核酸外切酶 IV Exonuclease IV產品特點:

1. 它包含內切位點和外切位點:

內切位點:與DNA雙鏈區結合,定位切割位點; 

外切位點:負責從DNA磷酸主鏈上切除3'端的核苷酸和磷酸基團。

2. 雙鏈特異性

Exonuclease IV只可作用于DNA雙鏈區,單鏈DNA區域不具有活性。這使其適用于研究DNA的二級結構。

3. 依賴性

Exonuclease IV的活性依賴Mg2+,并受到溶液的pH值影響,最適作用pH為8.5。高濃度的NaCl可抑制其活性。

4. 切割效率

在最適條件下,Exonuclease IV的切割速度為每秒60-100個磷酸基團,切割效率較高。

5. 5'磷酸化

Exonuclease IV切割產生3'突出的單鏈DNA和5'磷酸化的DNA斷端。這為其在DNA修補和重組中的應用提供了基礎。


核酸外切酶 IV Exonuclease IV Exonuclease IV主要應用包括:

1. DNA末端加工

Exonuclease IV可產生3'突出的單鏈DNA和5'磷酸化DNA端,這些DNA末端可用于連接、寡核苷酸鏈接及DNA修補等實驗。

2. DNA修補研究

Exonuclease IV切割產生的DNA末端可作為DNA修補反應的底物,用于研究DNA修補機理及相關酶的作用機制。 

3. 重組研究

Exonuclease IV切割產生的DNA末端可用于重組研究,如用于質粒的構建與驗證。

4. DNA二級結構分析

比較Exonuclease IV在雙鏈DNA和單鏈DNA上的切割活性,可以判斷DNA區域的二級結構,研究DNA的解旋和復性。

5. DNA拓撲結構分析

Exonuclease IV的切割活性受DNA的拓撲結構影響,可用于研究DNA的超螺旋和球狀結構等。

6. DNA蛋白質相互作用

DNA結合蛋白可影響Exonuclease IV的切割活性,利用這一特點可以研究DNA與蛋白質的相互作用機制。

7. 核苷酸切除測定

使用放射性標記的DNA,通過測量Exonuclease IV切割后釋放的放射性核苷酸來定量研究影響其活性的因素。

8. DNA損傷檢測

DNA損傷會阻礙Exonuclease IV的活性,通過比較不同DNA區域Exonuclease IV的切割效率可以檢測DNA損傷的位置和程度。

9. 遺傳學研究

Exonuclease IV可用于切割整個基因組DNA,產生特定長度的DNA片段,通過電泳分離和 Southern blot 分析染色體DNA,用于遺傳學研究。


核酸外切酶 IV Exonuclease IV Exonuclease IV在RPA技術中作用:

1. 降低非特異性產物

與Exonuclease III相似,Exonuclease IV可以通過降解非特異性擴增產物的5'單鏈末端來減少其濃度,提高RPA產物的純度和專一性。

2. 提高檢出靈敏度

Exonuclease IV通過降解未結合引物的游離單鏈DNA來減少反應底物,提高特異性擴增產物的相對濃度,增強RPA的檢出靈敏度。

3. 加快反應速度

類似Exonuclease III,Exonuclease IV可以減少底物競爭,使更多的引物和DNA聚合酶結合到特異性擴增區域,加快RPA的反應進程。

4. 改善產物分析

使用Exonuclease IV后可以得到更純凈的特異性RPA產物,便于電泳、測序等手段的檢測和分析。

5. 防止引物延伸

某些情況下,RPA的引物可能與非目標區域發生非特異性結合并延伸。Exonuclease IV可以降解這些非特異延伸產物的5'末端,防止引物的過度延伸,提高RPA的專一性。


相關RPA原料:

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