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Cat. Number
炎癥因子檢測試劑盒
Chemical Name
Cisbio HTRF 炎癥因子檢測試劑盒,炎癥研究檢測試劑
Qty 1
1000tests
References

炎癥因子是指在炎癥中起介質作用的物質,包括組胺、緩激膚、PGE2、PGD2、LTB4、LTC4.LTD4、粘附分子、趨化因子等。Cisbio 利用 HTRF 技術,提供快速、簡單的炎癥因子檢測方案目前包括 PGE2、LTB4、LTC4 和組胺。


實驗原理

HTRF PGE2,LTB4 和 LTC4 檢測都是基于 HTRF 技術的競性免疫反應。以 PEG2 為例,使用d2標記的 PGE2 和銷穴狀化合物 (Eu Cryptate)標記的 PGE2 抗體,樣品中的游離 PEG2與 d2標記 PEG2 競爭銷標記的 PEG2 抗體的抗原結合位點(圖 7)。當標記的 PEG2抗體與d2 標記的 PEG2 結合后,會發生能量共振轉移,從而產生熒光信號。樣品中的游離 PEG2 越多游離的 PEG2與抗體結合越多,熒光信號越小。


訂購信息

產品名稱產品規格產品貨號產品規格產品貨號
LTB4 Kit 500 tests 64LB4PEG1000 tests 64LB4PEH
LTC4 Kit 500 tests 64LC4PEG1000 tests 64LC4PEH
Prostaglandin E2 Kit 500 tests 62P2APEG1000 tests 62P2APEH
Histamine Dynamic Kit 96 tests 62HTMDPET500 tests 62P2APEG


產品特點

  • 可進行細胞、細胞上清液檢測和生化檢測。

  • 操作過程簡單、快速

  • 檢測范圍高

  • Z值高

  • 可以微型化到 10 uL 體系,適用于自動化操作和高通量篩選(HTS)

  • 不會與 PGH2 和 PGF2 產生交叉反應


產品應用

  • PGE2 用于檢測化合物對 COX-2 和前列腺素合成酶的調節

  • LTB4 和 LTC4 可分別用于檢測白三烯 A4 水解和白三烯 C4 合成酶的活性

  • 組胺試劑盒可對組胺進行定量檢測,進行過敏和哮喘評估


實驗過程

PEG2、LTB4 和 LTC4 的檢測過程為,在細胞刺激孵育后,只需要進行加入 HTRF 檢測試劑孵育一段時間即可讀數(圖9)


圖9.HTRFPGE2檢測過程

組胺檢測過程與PEG2、LTB4和LTC4測稍有不同,組胺檢測需要乙化,乙化和檢測可以在同一塊板子中同時進行(見圖 10),容易實現自動化操作。檢測過程包括兩步:

第一步:乙酷化

第二步:加入 HTRF試劑檢測組胺


產品性能

應用實例

PGE2 檢測

HTRFPGE2檢測試劑盒的一個優點是,在細胞存在的情況下不會降低分析性能。將 U937細胞與10nM豆佛波醇乙(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA) 一起培養 48 小時,然后將細胞以1,105個細胞//100 l與 10 g/ml 的脂多糖(LPS)以及不同濃度的美辛一起加入微孔板中。PGE2 檢測試劑可以直接加入細胞中,或者轉移 50  細胞上清液到新的微孔板中然后加入檢測試劑,室溫孵育 4 小時后,在 620nm 和 665nm 處分別讀取信號。結果如圖 11 所示,基于細胞的檢測與上清液檢測,兩者的結果沒有顯著差異。加入啊噪美辛 (PGE2 產生的抑制劑),刺激單核細胞產生 PGE2,HTRF 測得到噪美辛 IC50 (1.0 0. nM),與之前發表的數據一致。

圖11.基于細胞與上清液的 HTRF PEG2檢測,兩者結果一致

組胺檢測

大鼠嗜堿粒細胞(RBL-2H3),分別在含 2.5 uM 鈣離子載體 (ionomycin)和無離子載體條件下共培養,37C 刺激細胞 30 分鐘后用 HTRF”的釋放。在細胞裂解液中測定總的組胺含量,在只用培養基培養細胞中檢測細胞自發釋放的組胺含量。結果如圖 12 所示。


圖 12.大鼠嗜堿粒細胞的組胺釋放研究

相似的研究在人外周血嗜堿粒細胞中進行(圖13)。將離子載體得到的組胺非特異性釋放,與用膜結合的 lgE 與抗 gE 抗體交聯誘導的特異性脫粒進行比較。誤差線表示3 次重復的標準差。


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