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您的位置:首頁>>生命科學>>CRISPR系列>>HC23EH T7高產量RNA合成試劑盒 T7 High Yield RNA Synthesis Kit
Cat. Number
HC23EH
Chemical Name
HC23EH T7高產量RNA合成試劑盒 T7 High Yield RNA Synthesis Kit
References

T7高收率RNA合成試劑盒優化轉錄反應體系,利用T7 RNA聚合酶,以T7啟動子序列為模板的線性雙鏈DNA,以NTPs為底物控制啟動子下游DNA序列,高效合成單鏈RNA。在轉錄過程中,修飾過的核苷酸可以加入底物中制備生物素或染料標記RNA。

該試劑盒可合成長轉錄本和短轉錄本,1 μg DNA模板輸入可產生100 ~ 200 μg的RNA。轉錄合成的RNA可用于各種下游應用,如RNA結構和功能研究、RNase保護、探針雜交、RNAi、顯微注射和體外翻譯等。


產品信息:

貨號規格
HC23EH5050T
HC23EH100100T
HC23EH500500T


產品組分:

名稱
HC23EH50HC23EH100HC23EH500
T7 RNA Polymerase Mix100 μL200 μL1 mL
10×Transcription Buffer100 μL200 μL1 mL
ATP(100mM)100 μL200 μL1 mL
CTP(100mM)100 μL200 μL1 mL
GTP(100mM)100 μL200 μL1 mL
UTP(100mM)100 μL200 μL1 mL
Control DNA Template(500ng/μL)10uL20uL100uL


應用:

體外RNA合成


運輸和存儲:

干冰運輸。-20℃保存,有效期兩年。


反應體系(僅供參考):

組分體積(uL)終濃度
T7 RNA Polymerase Mix2-
10×Transcription Buffer2
CTP / GTP/ ATP/ UTP (100 mM each)2 each10 mM each
Template DNA1 μg-
RNase free H2OUp to 20-

注意:反應在室溫下進行,由于10×轉錄緩沖液中含有亞精胺,亞精胺濃度過高會導致DNA模板在低溫下沉淀。


備注:

1. 注意不要在反應系統中混入RNase。

2. 實驗設備(如:移液器尖端、產品管等)應嚴格使用RNase Free產品。

3.為了您的安全與健康,請穿白大褂,戴一次性手套。

4. 僅供研究使用!


常見問題解答

1. 轉錄產量低

模板的質量與成品率密切相關。試驗組的產量顯著低于對照組,可能的原因有:①實驗模板含有抑制成分;模板有問題。

建議:①重新純化模板;②確定模板定量及其完整性;③延長反應時間;④增加模板輸入量;⑤嘗試其他啟動子和RNA聚合酶。

2. 短轉錄產量低

短轉錄起始片段會抑制該反應。當轉錄產物小于100 nt時,延長反應時間至4-8 hs或增加模板量至2 μg均可提高RNA產量。

3.RNA轉錄長度大于預期

如果電泳顯示產物條帶大于預期條帶,可能的原因是:①質粒模板可能沒有完全線性化;②感覺鏈3’端結構突出;③RNA具有未完全變性的二級結構。

建議:①檢查模板是否完全線性化,必要時進行額外線性化;②選擇合適的限制性內切酶,避免3'外翻,或使用Klenow Fragment /T4 DNA聚合酶完成轉錄后再繼續;③用變性凝膠檢測RNA產物。

4. RNA轉錄長度低于預期

如果電泳顯示產物條帶小于預期大小,可能的原因是:①模板中含有類似于T7 RNA聚合酶的終止序列;②模板中GC含量較高。

建議:①降低反應溫度(如30℃)。有時降低溫度可以增加轉錄長度,但會降低產量?;蛘邍L試不同的RNA聚合酶進行轉錄;②若模板GC含量較高,可采用42℃轉錄,或添加SSB以增加產量和轉錄長度。

5. 轉錄產物的電泳跟蹤

電泳過程中出現拖尾現象??赡茉?①實驗操作過程中被RNase污染;②RNase污染DNA模板。

建議:①使用不含RNase的移液針尖和EP管,佩戴一次性乳膠手套和口罩,所有試劑均使用不含RNase的H2O制備。②重新純化模板DNA。


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GMP-002重組Her-2全人單克隆抗體2mg/10mg
GMP-003鼠抗人CD3單克隆抗體0.5mg/1mg
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GMP-005重組人Activin A50ug/1.0mg
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GMP-023重組人白細胞介素-1a(rhIL-1a)50ug/1.0mg
GMP-024重組人白細胞介素-2(rhIL-2)100ug/1.0mg
GMP-025重組人白細胞介素-3(rhIL-3)50ug/1.0mg
GMP-026重組人白細胞介素-4(rhIL-4)50ug/1.0mg
GMP-027重組人白細胞介素-6(rhIL-6)50ug/1.0mg
GMP-028重組人白細胞介素-7(rhIL-7)50ug/1.0mg
GMP-029重組人白細胞介素-12(rhIL-12)50ug/1.0mg
GMP-030重組人白細胞介素-15(rhIL-15)50ug/1.0mg
GMP-031重組人白細胞介素-18(rhIL-18)50ug/1.0mg
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GMP-041重組人腫瘤壞死因子(rhTNF-a)50ug/1.0mg
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GMP-043重組人血管內皮生長因子(rhVEGF)50ug/1.0mg
GMP-044重組人Wnt-3α(rhWnt-3α)50ug/1.0mg
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GMP-046牛轉鐵蛋白(Bovine Transferrin) inactivated virus1.0g/10.0g
GMP-047重組人干擾素α2b1.0mg
GMP-048重組人粒細胞集落刺激因子1.0mg
E-001重組CRISPR-Cas9蛋白100/500pmol
E-002重組CRISPR-Cas12a蛋白100/2000pmol
E-003重組CRISPR-Cas13a蛋白100/500pmol
E-004重組SUMO蛋白酶1000U
E-005重組TEV蛋白酶1000/10000U
E-006Spike Protein (RBD, mouseFc Tag)1mg/10mg
E-007Spike Protein (S1 Subunit, His Tag)1mg/10mg
VISC2-S002重組全長S蛋白 100ug/1.0mg
VISC2-RB04RBD蛋白 (RBD Subunit,His Tag)100ug/1.0mg
VISC2-RB05RBD-591蛋白(RBD-591 Subunit,His Tag)
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