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Cat. Number
His標簽蛋白純化介質(IDA)
Chemical Name
His標簽蛋白純化介質(IDA)
Qty 1
1ml
Qty 2
5ml
References

1. 產品簡介

His標簽蛋白純化介質適用于His標簽融合蛋白的純化,采用該產品可快速從細胞發酵液中提取His標簽融合蛋白。

His標簽蛋白純化介質(IDA)以IDA為金屬螯合配基,常規螯合Ni2+(常稱為鎳填料),亦可根據客戶需要螯合Cu2+,Co2+,Zn2+等離子基團。

請注意,選擇該產品時切勿在緩沖液中添加巰基乙醇或二硫蘇糖醇等還原劑,將導致金屬離子脫落(如需要添加還原劑組分,建議選擇NTA產品)。

2. 產品特性

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3. 應用

采用His標簽蛋白純化介質對組氨酸(His)標記蛋白質進行分離純化的過程通常包括平衡、進料、淋洗、洗脫、再生等步驟。

平衡:用5~10CV的平衡緩沖液平衡層析柱,至流出液電導和pH不變(與平衡液一致)。實際操作中,一般選用中性/弱堿性(pH 7~8)的高鹽(0.15~1.0 M NaCl或其它中性鹽)緩沖液。其中常用磷酸鹽緩沖體系,如20 mM PB+0.5 M NaCl, pH 7.4。對于結合力較強的帶組氨酸標記的蛋白質,平衡緩沖液中可加入低濃度(20~40 mM)的咪唑。

進料:樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制;低濃度樣品溶液可用平衡液透析;高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱,樣品應經離心或微濾處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算。

為了減少雜蛋白在層析柱上的吸附,可在確保目標蛋白吸附的情況下適當增加樣品緩沖液中的咪唑。對于包涵體蛋白,相應地可在平衡、上樣和洗脫的緩沖液中加入8M 尿素或6M 鹽酸胍。

淋洗:上樣完畢后繼續用平衡緩沖液淋洗至基線。

洗脫:洗脫一般有兩種方式,一是采用競爭試劑,如咪唑(0~0.5M)、組氨酸(0~0.05M)、氯化銨(0~2M)等將蛋白質從柱子上置換下來;二是減小pH值,洗脫目標蛋白,大多數蛋白質在pH 4~6的范圍內可被洗下來。用競爭試劑咪唑或減小pH值的方法洗脫蛋白質,金屬離子仍結合在柱子上;若用競爭試劑組氨酸或氯化銨洗脫蛋白質,會將金屬離子和蛋白質的復合物一起洗下來。

洗脫緩沖液中必須加入0.15~1.0 M NaCl以消除離子交換作用。梯度洗脫最好在起始平衡液的恒定pH下進行,可采用線性梯度或階越式梯度洗脫。

4. 再生

介質使用5-10次(具體與樣品特性、樣品體積、金屬離子等有關)后,或者鰲合其它金屬離子前,需要進行再生處理。

1)脫Ni

5-10倍體積的EDTA溶液(0.2M EDTA+0.5M NaCl, pH 7.0)清洗介質,然后用5-10倍體積的去離子水清洗以去除殘留的EDTA。

2)清洗

采用5-10倍體積的0.5-1M NaOH2M NaCl溶液或50%乙醇或者30%異丙醇)清洗介質,除去色素或者其他強吸附蛋白,然后用10-20倍體積的平衡緩沖液或去離子水清洗以去除殘留溶液。

3)掛Ni

采用2-5倍體積的0.2M NiSO4溶液與介質混合攪拌4h,然后過濾。(亦可柱上清洗)

4)平衡

采用20-30倍體積的去離子水清洗介質,去除殘留的Ni2+。如發現清洗液仍呈現藍色,應繼續清洗,直至藍色消失。

采用2-5倍體積的20%乙醇清洗介質,結束后儲存于4-8℃環境中。


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