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Cat. Number
HA11967
Chemical Name
HA11967蛋白預制膠 Bis-Tris 4-12%, 15孔, 1.5mm(玻璃膠盒)
Qty 1
10片/盒
References

產品簡介:

玻璃膠盒Bis-Tris gel 是一款安全、快捷、高性能的預制聚丙烯酰胺凝膠,MOPS buffer 和MES buffer 組合使用,更好的實現中大分子量蛋白和小分子量蛋白的分離。

? 采用自動化的灌膠生產技術,確保了產品質量的高穩定性和重復性。

? 采用玻璃膠板,有效減少蛋白非特異性吸附,使蛋白條帶更為敏銳,清晰。

? 電泳時間短,在150V 電壓下,電泳40-50 分鐘即可完成。

? 膠夾打開極為輕松,只需用刀片在膠夾一側輕輕劃一下即可打開。

? 凝膠中不含SDS, 可用于變性和非變性電泳。

? 兼容市場上主流的mini 電泳槽,如Bio-Rad, Invitrogen, 天能和君意東方等

? 提供多種濃度的均一膠和梯度膠。

均一膠可選濃度:8%,10%,12%,15%。

梯度膠可選濃度:4-12%,4-20%。也可以提供特殊濃度的定制服務。

注:使用熒光上樣緩沖液處理過的樣品,無需剝膠,無需經過染色脫色處理,即可直接在紫外燈或者LED 燈下觀察到蛋白條帶。


基本信息:

膠板尺寸:寬×高×厚度為98×84×4.1mm;

凝膠尺寸為:寬×高×厚度為81×74×1.5mm;

丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺的比例:29:1;

濃縮膠:4%,1.5cm;

凝膠厚度:1.5mm;

孔數:10 孔,15 孔;

最大上樣量:60μL,30μL;

包裝:10 片/盒。


預制膠選擇指導:

產品編號濃度孔數最大上樣量電泳緩沖液分離范圍建議電壓
HA119608%10孔60μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA119618%15孔30μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA1196210%10孔60μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA1196310%15孔30μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA1196412%10孔60μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA1196512%15孔30μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA1222715%10孔60μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA1222815%15孔30μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA119664-12%10孔60μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA119674-12%15孔30μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA122304-20%10孔60μLMOPS/MESTris-Bicin150V
HA122314-20%15孔30μLMOPS/MESTris-Bicin150V

非變性膠(Native-PAGE)使用說明:

1.非變性膠的蛋白遷移率受到蛋白分子量、蛋白空間結構等多種因素影響。

2.將GLASS Gel Bis-Tris gel 預制膠從包裝袋中取出。

3.將預制膠固定在電泳槽中。

4.準備非變性電泳緩沖液:該產品含1 包電泳緩沖液粉末,每包粉末可用500mL ddH2O(去離子水)進行溶解,得到500mL 10X 電泳液。取50mL 母液,加450mL ddH2O,得到500mL 1X 電泳緩沖液。

5.內槽加滿電泳液,外槽的電泳液最低須加到1/3 液面處,最高不可漫過膠板,再緩慢地將梳子拔出。

6.上樣前請使用移液器吸取電泳緩沖液輕輕吹打加樣孔,去除加樣孔內殘余的膠液。

7.上樣:將非變性蛋白樣品與5X 非變性loading buffer(ES005)進行4:1 混合均勻。注意槍頭不要戳破凝膠,不要過度插入梳孔使膠板變形造成漏液。

8.電泳條件:150 V, 60 min,當溴酚藍指示帶電泳至膠板底部,或實驗預定位置時,即可結束電泳。

9.電泳結束,取出凝膠。用刀在側邊硅膠處,沿著兩片玻璃的縫隙切開封膠材料,即可打開玻璃板,取膠時,需在凝膠和玻璃條之間,沿著玻璃條劃一刀,防止取膠時,發生粘連使膠破碎。(使用美工刀時請注意安全)

10.酸性蛋白(等電點pI<7)正常上樣電泳即可。反之,堿性蛋白(等電點pi>7)帶正電荷,需將電極插反(紅插黑,黑插紅),這時上樣孔成為正極,樣品向下電泳。


變性膠(SDS-PAGE)使用說明:

1.請參考分離譜圖選擇合適濃度的預制膠,以幫助您進行更好的蛋白電泳條帶分離。

2.將GLASS Gel Bis-Tris gel 預制膠從包裝袋中取出。

3.將預制膠固定在電泳槽中。

4.準備電泳緩沖液:該產品含1 包電泳緩沖液粉末,每包粉末可用500mL ddH2O(去離子水)進行溶解,得到500mL 10X 電泳液。取50mL 母液,加450mL ddH2O,得到500mL 1X 電泳緩沖液。

5.內槽加滿電泳液,外槽的電泳液最低須加到1/3 液面處,最高不可漫過膠板,再緩慢地將梳子拔出。

6.上樣前請使用移液器吸取電泳緩沖液輕輕吹打加樣孔,去除加樣孔內殘余的膠液。

7.上樣:將蛋白樣品與5X 變性loading buffer進行4:1 混合均勻,加熱處理。注意槍頭不要戳破凝膠,不要過度插入梳孔使膠板變形造成漏液。

8.電泳條件:150 V, 40~50 min,當溴酚藍指示帶電泳至膠板底部,或實驗預定位置時,即可結束電泳。

9.電泳結束,取出凝膠。用刀在側邊膠處,沿著兩片玻璃的縫隙切開封膠材料,即可打開玻璃板,取凝膠時,需在凝膠和玻璃條之間,沿著玻璃條劃一刀,防止取膠時,發生粘連使膠破碎。(使用美工刀時請注意安全)


產品運輸和保存:

1.常溫運輸,常溫保存時應放置于陰涼處,避免溫度劇烈變化和陽光直射。

2.4-8℃保存,可以存放12 個月。

3.請勿置于0℃以下,凝膠在0℃以下會凍凝,產生氣泡和裂紋,凝膠報廢。


拆膠:

1.先沿側邊膠處簡單劃一刀(或先將玻璃板側邊多余封膠材料去除);

2.用刀在側邊膠處,沿著玻璃板和玻璃條的縫隙切開封膠材料(箭頭處),輕輕打開玻璃板;

3.取膠時,需在凝膠和兩側玻璃條之間沿著玻璃條劃一刀,防止取膠時發生粘連使凝膠破碎。



玻璃膠盒兼容的電泳槽:

玻璃膠盒系列預制膠可以兼容大部分的mini SDS-PAGE 電泳槽,包括

a.Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)

b.Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)

c.Life Technology Novex Mini-Cell (請與特制擋板配合使用)

d.北京六一DYCZ-25E、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF

e.君意東方JY-SCZ2+

f.天能VE180或其它膠板寬度在10 厘米的電泳槽


在Life Technology Novex 電泳槽中的應用:

由于玻璃膠盒系列 系列預制膠比Invitrogen NuPAGE 預制膠略薄,所以需要特制的擋板,使得該系列預制膠能夠適用于Life TechnologyNovex 電泳槽。如有需要,請在訂購本產品時告知。


在Bio-Rad 電泳槽中的應用:

Bio-Rad Mini-PROTEAN 系列電泳槽的U 型密封條頂部有突起結構,而玻璃膠盒系列系列預制膠的短玻板是凹形結構,因此該部位是平的,電泳前需將具有突起結構的密封條取出后反過來安裝,是平滑面朝外,從而防止漏液(如下圖所示)。另有厚度約為0.5mm 的塑料墊片,請根據您電泳槽的實際寬度進行相應的增加。

a.將Bio-Rad 電泳槽中的U 型密封條(如圖綠色部分) 拉出,注意這時的密封條兩端是有突起的,突起的這面為正面,無突起的為反面。

b.將密封條旋轉180 度(正面朝里,反面朝外),重新裝回電泳槽中,注意把密封圈周邊壓實,防止發生漏液。

c.放置好預制膠進行正常的電泳操作即可。


注意事項:

1.Bis-tris gel預制膠使用的是MOPS 或者MES 緩沖系統,請勿使用Tris-Gly 等其他電泳緩沖液進行電泳。

1.1.使用專門配制的MOPS 電泳緩沖液;

1.2.使用專門配制的MES 電泳緩沖液;

2.如果需要蛋白條帶更加清晰、平直,可降低電壓至100-120V, 適當延長電泳時間。

3.電壓為150V 時,1 塊膠的電流在80mA 左右,2 塊膠的電流在140mA 左右,隨時間增加電流逐步降低。

4.如要重復使用電泳緩沖液, 建議每次更換內槽電泳緩沖液, 外槽根據電泳實際情況更換。為了保證最佳電泳效果,不建議重復使用電泳緩沖液。

5.濕轉時120V 恒壓轉膜60-90min。為達到更好的轉膜效果,可以根據預制膠上殘留的預染marker 及膜上的預染marker 確定轉膜效率,并對轉膜條件進行適當調整。目的蛋白的分子量,凝膠濃度及轉膜液中的甲醇濃度都會影響轉膜效率。大蛋白盡量選擇低濃度的膠。蛋白分子量100kDa 以上10-100kDa 10kDa 以下建議甲醇濃度5% 10% 20%-30%

6.電泳結束后可以使用Tris-Bicine 轉膜液進行轉膜。將凝膠浸泡在轉膜液中10-15min, 使凝膠中的緩沖

液得到充分平衡,再進行轉膜。

7.上樣時槍頭不要過度插入梳孔,以免戳破凝膠造成漏液。

8.如需分離<10 kDa 的蛋白,建議可以使用Cat#:HA11942嘗試。如要確保電泳結果, 建議使用Cat#:

HA11982,Tricine 體系預制膠。

9.僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。

10.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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