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Cat. Number
HA11959
Chemical Name
HA11959蛋白預制膠 Tris-Gly, 體驗裝(塑料膠盒)
Qty 1
2片/盒
References

產品簡介:

塑料膠盒Tris-Gly gel 是一款安全、快捷、高性能的預制聚丙烯酰胺凝膠,常用于

PAGE 和Western blot 檢測。

? 采用自動化的灌膠生產技術,確保了產品質量的高穩定性和重復性。

? 采用鍍膜塑料膠板,有效減少蛋白非特異性吸附,使蛋白條帶更為敏銳,清晰。

? 電泳時間短,使用超快電泳緩沖液(Cat.#:EZB2006),在250V 電壓下,電泳20 min 即可完成。

? 膠夾打開極為輕松,塑料板可以用起翹工具撬開。

? 凝膠中不含SDS, 可用于變性和非變性電泳。

? 兼容市場上主流的mini 電泳槽,如Bio-Rad, 天能和君意東方等

? 提供多種濃度的均一膠和梯度膠。

均一膠可選濃度:6%,8%,10%,12%,15%。

梯度膠可選濃度:4-15%,4-20%。也可以提供特殊濃度的定制服務。

基本信息:

膠板尺寸:寬×高×厚度為100*89*4.8mm; 凝膠厚度:1.0mm;

凝膠尺寸為:寬×高×厚度為84*74*1mm; 孔數:10 孔,15 孔;

丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺的比例:29:1; 最大上樣量:30μL,50μL

濃縮膠:4%,1.5cm; 包裝:10 片/盒。


預制膠選擇指導:

產品編號濃度孔數最大上樣量電泳緩沖液分離范圍建議電壓
HA119456%10孔50μLTris-gly60-200kDa180V
HA119466%15孔30μLTris-gly60-200kDa180V
HA119478%10孔50μLTris-gly40-200kDa180V
HA119488%15孔30μLTris-gly40-200kDa180V
HA1194910%10孔50μLTris-gly20-160kDa180V
HA1195010%15孔30μLTris-gly20-160kDa180V
HA1195112%10孔50μLTris-gly15-85kDa180V
HA1195212%15孔30μLTris-gly15-85kDa180V
HA1195315%10孔50μLTris-gly10-50kDa180V
HA1195415%15孔30μLTris-gly10-50kDa180V
HA119554-15%10孔50μLTris-gly20-200kDa180V
HA119564-15%15孔30μLTris-gly20-200kDa180V
HA119574-20%10孔50μLTris-gly5-200kDa180V
HA119584-20%15孔30μLTris-gly5-200kDa180V


使用說明:

預制膠本身都不含SDS,可根據電泳緩沖液的不同用于變性電泳和非變性電泳

非變性膠(Native-PAGE)

1.非變性膠的蛋白遷移率受到蛋白分子量、蛋白空間結構等多種因素影響。

2.將Precast Gels Plus Tris-Gly gel 預制膠從包裝袋中取出,撕掉底部密封膠帶。

3.將預制膠固定在電泳槽中。

4.準備非變性電泳緩沖液:該產品含1 包電泳緩沖液粉末,每包粉末可用500mL ddH2O(去離子水)進行溶解,得到500mL 10X 電泳液。取50mL 母液,加450mL ddH2O,得到500mL 1X 電泳緩沖液。

5.陰極加滿電泳液,陽極的電泳液最低須加到1/3 液面處,最高不可漫過膠板,再緩慢地將梳子拔出。

6.上樣前請使用移液器吸取電泳緩沖液輕輕吹打加樣孔,去除加樣孔內殘余的膠液。

7.上樣:將非變性蛋白樣品與5X 非變性loading buffer(ES005)進行4:1 混合均勻。注意槍頭不要戳破

凝膠,不要過度插入梳孔使膠板變形造成漏液。

8.電泳條件:180 V, 60 min,當溴酚藍指示帶電泳至膠板底部,或實驗預定位置時,即可結束電泳。

9.電泳結束,取出凝膠。用起翹器在板子側邊緣慢慢撬開板子,打開膠盒,輕輕取出凝膠。

9.酸性蛋白(等電點pI<7)正常上樣電泳即可。反之,堿性蛋白(等電點pi>7)帶正電荷,需將電極插反

(紅插黑,黑插紅),這時上樣孔成為正極,樣品向下電泳。


變性膠(SDS-PAGE)

1.請參考下面的分離圖譜選擇合適濃度的預制膠,以幫助您進行更好的蛋白電泳條帶分離。

2.將Precast Gels Plus Tris-Gly gel 預制膠從包裝袋中取出,撕掉底部密封膠帶。

3.將預制膠固定在電泳槽中。

4.準備電泳緩沖液:該產品含1 包電泳緩沖液粉末,每包粉末可用500mL ddH2O(去離子水)進行溶解,得到500mL 10X 電泳液。取50mL 母液,加450mL ddH2O,得到500mL 1X 電泳緩沖液。

5.陰極加滿電泳液,陽極的電泳液最低須加到1/3 液面處,最高不可漫過膠板,再緩慢地將梳子拔出。

6.上樣前請使用移液器吸取電泳緩沖液輕輕吹打加樣孔,去除加樣孔內殘余的膠液。

7.上樣:將蛋白樣品與5X 變性loading buffer進行4:1 混合均勻,加熱處理。注意槍頭不要戳

破凝膠,不要過度插入梳孔使膠板變型造成漏液。

8.電泳條件:180 V, 60 min,當溴酚藍指示帶電泳至膠板底部,或實驗預定位置時,即可結束電泳。

9.電泳結束,取出凝膠。


預制膠分離圖譜(變性):


產品運輸和保存:

1.常溫運輸,常溫保存時應放置于陰涼處,避免溫度劇烈變化和陽光直射。

2.4-8℃保存,可以存放12 個月。

3.請勿置于0℃以下,凝膠在0℃以下會凍凝,產生氣泡和裂紋,凝膠報廢。

Precast Gels Plus 兼容的電泳槽:

Precast Gels Plus 系列預制膠可以兼容大部分的mini SDS-PAGE 電泳槽,包括

a.Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)

b.Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)

c.Life Technology Novex Mini-Cell (請與特制擋板配合使用)

d.北京六一DYCZ-25E、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF

e.君意東方JY-SCZ2+

f.天能VE180

g.或其它膠板寬度在10 厘米的電泳槽


在Bio-Rad 電泳槽中的應用:

Bio-Rad Mini-PROTEAN 系列電泳槽的U 型密封條頂部有突起結構,而塑料膠盒系列預制膠的短玻板是凹形結構,因此該部位是平的,電泳前需將具有突起結構的密封條取出后反過來安裝,是平滑面朝外,從而防止漏液(如下圖所示)。另有厚度約為0.5mm 的塑料墊片,請根據您電泳槽的實際寬度進行相應的增加。

a.將Bio-Rad 電泳槽中的U 型密封條(如圖綠色部分) 拉出,注意這時的密封條兩端是有突起的,突起的這面為正面,無突起的為反面。

b.將密封條旋轉180 度(正面朝里,反面朝外),重新裝回電泳槽中,注意把密封圈周邊壓實,防止發生漏液。

c.放置好預制膠進行正常的電泳操作即可。


注意事項:

1.Tris-Gly gel 預制膠使用的是中性的Tris-Gly 緩沖系統。

1.1.使用我司超快電泳緩沖液,250V 僅需20min 即可完成電泳;

1.2.使用Tris-Gly 變性緩沖液或非變性緩沖液,180V,60min;

2.如果需要蛋白條帶更加清晰、平直,可降低電壓至150V, 適當延長電泳時間。

3.電壓為180V 電泳時,1 塊膠的電流在75mA 左右,2 塊膠的電流在150mA 左右,隨著時間增加電流逐步降低。

4.電泳緩沖液不建議重復使用。因為經過電泳之后,緩沖液中的離子強度、緩沖能力都發生了變化,不能確保電泳效果。

5.濕轉時120V 恒壓轉膜60-90min。為達到更好的轉膜效果,可以根據預制膠上殘留的預染marker 及膜上的預染marker 確定轉膜效率,并對轉膜條件進行適當調整。目的蛋白的分子量,凝膠濃度及轉膜液中的甲醇濃度都會影響轉膜效率。大蛋白盡量選擇低濃度的膠。

6.電泳結束后使用Tris-Gly 轉膜液進行轉膜。

7.上樣時槍頭不要過度插入梳孔,以免戳破凝膠造成漏液。

8.如需分離<10 kDa 的蛋白,建議可以使用Cat#:HA11957嘗試。如要確保電泳結果, 建議使用Cat#:HA11982,Tricine 體系預制膠。

9.僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。

10.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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