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您的位置:首頁>>生命科學>>CRISPR系列>>HA11620 SpCas9
Cat. Number
HA11620
Chemical Name
HA11620 SpCas9
Qty 1
100pmol
Qty 2
1000pmol
Storage condition
-20℃
References

SpCas9 來源于 S. pyogenes 菌株,是依賴于 crRNA 和 tracrRNA(或連接后形成的 sgRNA)引導的 DNA 內切核酸酶,在靶標雙鏈 DNA 存在 PAM(NGG)的情況下,特異地剪切靶標雙鏈 DNA,使 DNA 雙鏈斷裂 并生成平末端。PAM 對于 Cas9 的識別和剪切都是必需的,其剪切位點位于目標序列(target sequence)內, 離 PAM 區 3 個堿基。此外,在 PAMmer 序列存在時,SpCas9 也能特異地剪切單鏈 DNA 或 RNA(詳細信 息請參考 PMID: 24476820;PMID: 25274302)。此酶還可應用于體外靶標 DNA 的剪切、目的片段的克隆等 實驗(詳細信息可參考 PMID: 26323354) 。


產品組成

SpCas9 Nuclease (10 μM)            100 pmol

10 × Buffer 3                                1mL

Control Target DNA and sgRNA   5 μL

注:1. SpCas9 Nuclease 濃度為 10 μM,即 10 pmol/μL,100 pmol 規格的總體積為 10 μL,1,000 pmol 規格的總體積為 100 μL;

2. Control Target DNA and sgRNA 應保存于-80℃并避免反復凍融,必須在 6 個月內使用,使用時建議取 0.5 μL 至每 20 μL 反應體系


實驗流程

1. 順式剪切實驗


組分體積終濃度
10 ×  Buffer 32 μL1 ×
10 μM SpCas9 Nuclease0.5 μL250 nM
10 μM sgRNA0.5 μL250 nM
1 μM Target dsDNA0.5 μL25 nM
Nuclease-free waterUp to 20 μL

若用核酸電泳來分析順式剪切產物,對于 20 μL 順式剪切應體系,推薦 target DNA的使用量為 100 ng~500 ng,且 target DNA片段 長度在 300 bp~3 kb 范圍內。不同長度 target DNA 需要的 Cas 酶和 sgRNA 的量需要根據 target DNA 的摩爾量計算,建議保持 Cas 酶:sgRNA:target DNA的摩爾比為 10:10:1,以盡量確保 target DNA被剪切完全。 

37℃反應 30 min~1 h,85℃滅活 5 min。核酸電泳分析順式剪切產物。


實驗結果

image.png


注意事項


1. 為防止 RNase 污染,請保持實驗區干凈整潔,操作時需穿戴干凈的手套、口罩,實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。

2. 因反應需添加 RNA(sgRNA 或者 crRNA:tracrRNA),整個體系,包括 Cas9 酶都必需不含任何 RNase 活性。本產品經過嚴格質控,無任何其它核酸酶污染。

3. Cas9 酶對熱敏感,容易失活,應全程冰上配置反應體系,使用后立即置于-20℃保存。

4. Cas9 酶與 DNA、sgRNA 形成復合物會影響電泳,需 85℃高溫失活 Cas9 酶后電泳檢測。

5. 本產品僅供科研使用


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生產實力.png


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E-002重組CRISPR-Cas12a蛋白100/2000pmol
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E-004重組SUMO蛋白酶1000U
E-005重組TEV蛋白酶1000/10000U
E-006Spike Protein (RBD, mouseFc Tag)1mg/10mg
E-007Spike Protein (S1 Subunit, His Tag)1mg/10mg
VISC2-S002重組全長S蛋白 100ug/1.0mg
VISC2-RB04RBD蛋白 (RBD Subunit,His Tag)100ug/1.0mg
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