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您的位置:首頁>>生命科學>>CRISPR系列>>HA11501/32119 Cas14a1 Crispr 核酸酶
Cat. Number
HA11501/32119
Chemical Name
HA11501/32119 Cas14a1 Crispr 核酸酶
CAS Number
HA11501/32119
Mol. Weight
64.9 kd
Qty 1
100pmol
Qty 2
1000pmol
Storage condition
組分-20℃儲存;≤ 0℃運輸。
References

Un1Cas12f1(又名Cas14a)是依賴于crRNA和tracrRNA共同介導的(或融合后的sgRNA單獨介導的)DNA核酸內切酶,能特異結合并切割靶標ssDNA,且不受PAM位點的限制。此外,Un1Cas12f1也能以PAM依賴的方式特異地剪切靶標dsDNA,使DNA雙鏈斷裂并生成粘性末端。與其他Cas12蛋白類似,Un1Cas12f1蛋白同樣擁有針對ssDNA的反式切割活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性),雙鏈或單鏈DNA靶標均能激活Un1Cas12f1的反式剪切活性,即當Un1Cas12f1蛋白與sgRNA、靶標DNA結合形成三元復合物后,便會被激活針對非特異序列ssDNA的反式剪切活性,將體系中的任意序列ssDNA切碎。
相比于其他的Cas蛋白,Cas12f1蛋白的分子量普遍較小(400~700AA),其中Un1Cas12f1的分子量約61.5 kD,可用于靶標核酸的分子檢測(詳細信息請參考PMID: 30337455)。上?;菡\生物優勢提供CRISPR基因編輯系列,咨詢訂購熱線:021-60498804


產品組成  

Cas14a1 Nuclease (10 μM) a100 pmol
10 × HOLMES Buffer 11 mL

 a.Un1Cas12f1 Nuclease濃度為10 μM,即10 pmol/μL,100 pmol規格的總體積為10 μL,1,000 pmol規格的總體積為100 μL;


實驗流程

  1. 反式剪切實驗


    組分體積終濃度
    10 × HOLMES Buffer 1
    2 μL
    1 ×
    10 μM Cas14a1 Nuclease
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    10 μM sgRNA
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    10 μM Target DNA
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    10 μM ssDNA Reporter
    0.05~0.5 μL
    25~250 nM
    Nuclease-free water
    Up to 20 μL

◆ 反式剪切體系中Target DNA可為ssDNA或帶PAM序列的dsDNA。

◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據不同的實驗目的進行調整,用量較少時可先將各組分稀釋后加入體系,AapCas12b Nuclease可用1×HOLMES Buffer1稀釋,稀釋后需立即使用(若要稀釋后的Cas12酶長期保存,請使用Cas12 Dilution Buffer,#32012),sgRNA、Target DNA及ssDNA Reporter可用Nuclease-free Water稀釋,但極低濃度的Target DNA(例如LOD實驗)建議用0.1% Tween 20稀釋并使用低吸附的離心管、吸頭等耗材。

◆ 反式剪切體系中探針的用量和預期反應到達平臺期的時間可參考各批號Cas酶transU的具體數值,詳見本公司提供的COA檢測報告。

◆ 實時熒光定量PCR儀檢測熒光信號,37℃反應,每30 sec采集一次熒光信號。


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E-003重組CRISPR-Cas13a蛋白100/500pmol
E-004重組SUMO蛋白酶1000U
E-005重組TEV蛋白酶1000/10000U
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E-007Spike Protein (S1 Subunit, His Tag)1mg/10mg
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